Détection de Mycoplasmes

Suite à de nombreux tests avec différents kits disponibles sur le marché et négociations avec les fournisseurs, le Service de Préparation de Solutions a décidé de sous-traiter les analyses de Mycoplasmes auprès d’une société extérieure: Eurofins Genomics.

Les tests Mycoplasmacheck sont effectués selon une méthode par qPCR mise au point par le prestataire et certifiant la détection d’un très large éventail de souches de Mycoplasmes.

Le choix de sous-traiter avec cette société s’est confirmé par la rapidité de la transmission des rapports de résultats et les certificats d’analyses, émis par un organisme accrédité, dans le format requis par certains journaux scientifiques lors de la soumissions d’articles.

Les utilisateurs désirant faire appel à cette prestation doivent préparer leurs échantillons de manière adéquate avant de les transmettre au Service de Préparation de Solutions qui se chargera de d’aliquoter les milieux, d’effectuer les envois des échantillons au prestataire et d’archiver un doublon à -20°C au cas où des analyses complémentaires se révéleraient nécessaires.

Attention: Les utilisateurs faisant appel à la prestation d’analyse des Mycoplasmes pour la première fois sont priés de prendre contact avec le Service de Préparation de Solution pour qu’un profil utilisateur leur soit créé sur le formulaire de commande.

Recommandations de culture

• Les lignées cellulaires doivent être cultivées en l’absence d’antibiotiques et de détergent pendant au moins une semaine avant le prélèvement de l’échantillon à analyser, pour éviter des résultats faussement négatifs;
• Il doit s’être écoulé au moins 3 jours depuis la dernière dilution du milieu de culture. Il est recommandé de prélever des échantillons pour l’analyse des Mycoplasmes sur des cultures de cellules ayant une confluence de 80%;
• Les lignées cellulaires cryopréservées doivent avoir été mises en culture 2 semaines minimum avant le prélèvement de l’échantillon à analyser.

Procédure pour la préparation des échantillons

• Les échantillons doivent être préparés en utilisant des pointes de pipettes et des tubes RNase/DNase free uniquement. Nous recommandons le matériel de la liste en bas de page, qui peut être commandé au Magasin Facultaire SV par le biais de Catalyse/SciQuest;
• Les utilisateurs doivent fournir des échantillons de 0.5 mL à 1mL de surnageants de culture, accompagnés d’un aliquot du milieu de culture correspondant comme contrôle, qui pourra être testé si des analyses supplémentaires sont requises;
• Les utilisateurs sont priés de bouillir leurs échantillons à 95°C pendant 10 minutes. Cette étape est cruciale dans le but de dénaturer l’ADN et ainsi le rendre disponible pour l’analyse subséquente, ainsi que pour détruire tout agent biologique potentiellement pathogène présent dans l’échantillon. De ce fait, tous les échantillons de culture de type P2 doivent être obligatoirement bouillis AVANT d’être sortis du laboratoire P2.
• La demande d’analyse doit être effectuée avant de transmettre les échantillons au Service par le biais du formulaire en ligne suivant:

>>Formulaire de commande Mycoplasmacheck<<

• Les échantillons préparés selon la procédure ci-dessus doivent être identifiés avec le nom indiqué dans la commande;
• Les échantillons et une copie de la confirmation de commande sont à déposer dans le congélateur se trouvant dans le local SV 1836, avant vendredi midi (congélateur -20°C Myco Test, 11ème tiroir).

Matériel recommandé pour la préparation des échantillons

Tous les consommables ci-dessous sont en stock interne au Magasin Facultaire SV et peuvent être commandés par le biais de SciQuest/Catalyse.